二級(jí)生物安全柜的密閉性較高,可用于處理病原微生物。為確保實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的環(huán)境和人員安全,需要對(duì)生物安全柜中的空氣和表面進(jìn)行定期檢測(cè),并計(jì)算菌落數(shù)量。
菌落是細(xì)菌或真菌在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的集合體,通??捎萌庋塾^察到。計(jì)算菌落數(shù)量可以幫助判斷實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的微生物污染狀況,以及評(píng)估操作人員是否符合操作規(guī)程。
菌落數(shù)量計(jì)算步驟如下:
1.準(zhǔn)備培養(yǎng)基和樣品:選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,按照要求制備并嚴(yán)格控制消毒過(guò)程。取樣時(shí)應(yīng)使用無(wú)菌工具,在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同區(qū)域、設(shè)備表面等采集樣品。
2.培養(yǎng):將取得的樣品均勻涂布在培養(yǎng)基表面,然后放入孵化箱進(jìn)行培養(yǎng)。根據(jù)不同的微生物類(lèi)型和培養(yǎng)條件,培養(yǎng)時(shí)間一般為24-48小時(shí)。
3.菌落計(jì)數(shù):在培養(yǎng)結(jié)束后,觀察培養(yǎng)基表面是否有形成菌落。如果有,則使用計(jì)數(shù)器或顯微鏡對(duì)菌落數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)。在計(jì)數(shù)過(guò)程中應(yīng)注意避免重復(fù)計(jì)數(shù)同一菌落,以及排除培養(yǎng)基上的色素和異物干擾。
4.數(shù)據(jù)處理:將菌落數(shù)量轉(zhuǎn)化為每個(gè)單位面積(如每平方厘米)的菌落數(shù)量,以便更好地比較不同樣品之間的差異。通常采用的單位包括CFU/cm²或CFU/m³。
在操作過(guò)程中需要注意以下幾點(diǎn):
1.嚴(yán)格控制無(wú)菌操作,避免污染樣品和培養(yǎng)基。
2.在菌落計(jì)數(shù)前擺正顯微鏡或計(jì)數(shù)器,并選擇合適的放大倍數(shù)。
3.對(duì)于較小的菌落和聚集的菌落,可以使用放大鏡或不同顏色的計(jì)數(shù)筆來(lái)進(jìn)行計(jì)數(shù)。
4.對(duì)于存在不同種類(lèi)的微生物的情況,需要對(duì)不同類(lèi)型的菌落進(jìn)行分類(lèi)計(jì)數(shù)。
5.記錄計(jì)數(shù)結(jié)果并按照規(guī)定格式進(jìn)行報(bào)告,包括樣品名稱(chēng)、采樣時(shí)間、媒介類(lèi)型、培養(yǎng)條件和菌落數(shù)量等信息。
正確的菌落數(shù)量計(jì)算方法是確保實(shí)驗(yàn)室內(nèi)微生物檢測(cè)和防護(hù)工作的重要步驟之一。在實(shí)際操作中,需要嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行操作,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行科學(xué)合理的解釋和分析,以便更好地保障實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的安全和穩(wěn)定性。